Syntezza Bioscience成立于2003年，专注于在以色列提供优良的分子生物学产品和测序服务，我们是以色列的供应商。我们的经验丰富的分子生物学家团队紧跟新技术，以便为客户挑选最佳产品方案，并协助定制产品的设计。Syntezza为学术和政府研究机构、医院及健康维护组织（HMO）以及制药、农业、环境、生物技术和医疗诊断行业的企业客户提供服务。

CleanCap reagent M6 试剂

一、结构中修饰的意义

• m?G：7 - 甲基鸟苷，天然 Cap-1 核心

• 3′OMe-G：鸟苷 3′-O - 甲基 → 抗去帽酶、提高稳定性

• m?A：N?- 甲基腺苷 → 增强 mRNA 稳定性、提升翻译

• 2′OMe-A：腺苷 2′-O - 甲基 → 抗核酸酶、降低免疫原性

• ppp 三磷酸桥：保证共转录时被 T7 聚合酶识别

二、合成路线（syntezza，分步简化）

1. 制备三个关键修饰核苷

1. m?G(3′OMe)

• 鸟苷 → N7 - 甲基化（MeI）→ m?G

• ?；?5′-OH → 3′-O - 甲基化 → m?G (3′OMe)

2. m?A(2′OMe)

• 腺苷 → N6 - 甲基化（MeI/DMF）→ m?A

• 保护 5′-OH → 2′-O - 甲基化 → m?A (2′OMe)

3. G（?；ぬ浩胀褴?，仅保护 5′-OH

2. 分步磷酸化

• m?G(3′OMe)-5′-P：单磷酸化（POCl?）

• m?A(2′OMe)-5′-PP：二磷酸化

• 缩合：m?G(3′OMe)-P + m?A(2′OMe)-PP → m?G(3′OMe)-ppp-m?A(2′OMe)（碳二亚胺类缩合剂）

3. 连接末端 G

• 三磷酸中间体 + ?；ぬ?G → m?G3′OMe-ppp-m?A2′OMe-pG（单磷酸键连接）

4. 脱保护与纯化

• 脱?；ぃ篢BAF 或催化氢化脱除硅基 / 苄基保护基

• 纯化：离子交换 HPLC + 重结晶 → 纯度 ≥98%

CleanCap reagent M6 试剂

VT 应用（共转录加帽）

• 浓度：CleanCap M6 10 mM；NTP（含 N1MePsU）各 5 mM

• 缓冲液：40 mM Tris-HCl pH 7.5、15 mM MgCl?、10 mM DTT、2 mM 亚精胺

• 聚合酶：M6 CleanScribe™ T7 RNA 聚合酶

• 加帽效率：>95%

• 产量：常规 4–5 mg/mL；补料可达 8–10 mg/mL

上海宝叶生物科技有限公司

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